1. PacBio測序平臺的技術原理？
利用 PacBio RS II/Sequel 進行全長轉錄組測序，平臺包含 16 個測序模塊（SMRT cell），每個 SMRT cell 包含 15 萬/100萬個測序單元（零模波導孔，ZMWs）。需要將 mRNA 進行反轉錄并進行環化處理，形成 CCS，每個 ZMW（零模波導孔）將容納 1 個 CCS 分子。由于全長轉錄組測序對 mRNA 不進行打斷，直接進行上機測序，而每個 CCS 的片段長度不同，較小的 CCS 會先落入 ZMWs 中，而導致長片段很難測到。因此，在文庫構建時，需要將 mRNA 根據長度分成不同的段，分別構建文庫和測序。
2. PacBio測序平臺測序方案有什么推薦？
對樣本進行分段處理，構建不同片段長度的文庫，我們推薦每個樣本構建3-6個文庫。 建議8-15G subreads。
3. 全長轉錄組測序分析內容包括哪些？
分析內容包括：轉錄本覆蓋度計算、轉錄本功能注釋、轉錄本GO 分類注釋、轉錄本 eggNOG分類注釋、轉錄本KEGG分類注釋、ORF分析、可變剪接分析等。
