簡述真核轉錄組常規建庫流程
1）通過磁珠和mRNA的polyA結構將mRNA分離出來；
2）mRNA片段化；
3）mRNA反轉錄為雙鏈結構，第二鏈cDNA合成時，其中的堿基T，被替換成U，從而達到鏈特異性文庫的目的；
4）5’末端修復、3’末端加A；
5）加接頭；
6）選擇特異長度回收，一般為300bp；
7）PCR；
8）上機測序。
如何對得到的數目較多的差異基因進行后期驗證？
首先根據GO或者KEGG富集結果，或者客戶關注的基因，選取有代表性的進行qRT-RCR驗證。然后根據RPKM值，選擇RPKM值差異倍數答，同時p值小的基因進行qRT-RCR驗證。
